一、基礎信息
1. 產品貨號與名稱
- 貨號:TR-100-FJT、TR-100-FJ
- 英文名稱:Fluoro-Jade C (FJC) Ready-to-Dilute Staining Kit for identifying Degenerating Neurons
- 中文名稱:Fluoro-Jade C (FJC) 退化神經元染色試劑盒
2. 規格與品牌
- 規格:20 mL、40mL
- 品牌:Biosensis
二、核心原理
1. Fluoro-Jade C 的化學特性
Fluoro-Jade C(FJC)是一種陰離子熒光素衍生物,通過特殊化學修飾增強了與變性神經元的親和力。其分子結構包含多個羧基基團,使其在生理條件下帶負電荷,能夠特異性結合變性神經元膜表面暴露的酸性磷脂和變性蛋白質(如磷酸化神經絲)。
2. 染色機制
- 變性神經元識別:當神經元發生退行性變時,細胞膜通透性增加,酸性成分暴露。FJC通過靜電相互作用和疏水效應結合這些成分,形成穩定的熒光標記。
- 高分辨率成像:FJC的激發峰為495 nm,發射峰為521 nm,與FITC濾光片兼容,可清晰顯示退化神經元的胞體、樹突、軸突及末端形態,分辨率顯著優于傳統銀染和早期Fluoro-Jade染料(如FJ、FJB)。
- 抗褪色性能:FJC分子結構中的剛性平面設計使其具有優異的抗光漂白能力,染色結果可長期保存(4℃避光保存數周),適合高分辨率共聚焦顯微鏡成像。
三、解決實驗中的關鍵問題
1. 傳統方法的局限性
- 銀染技術:操作繁瑣、耗時(需2-3天),且無法與免疫熒光標記兼容,難以實現多重染色。
- TUNEL法:僅檢測DNA斷裂,無法顯示神經元整體形態,且對早期變性神經元不敏感。
- 硫黃素S等染料:特異性差,易與淀粉樣斑塊非特異性結合,背景干擾嚴重。
2. FJC染色的突破性解決方案
- 全階段變性神經元檢測:可同時標記凋亡、壞死和自噬性死亡的神經元,覆蓋從早期胞體腫脹到晚期軸突斷裂的完整退變過程。
- 形態學與功能學結合:在顯示神經元退變的同時,可與NeuN、TH等抗體進行多重染色,明確退變神經元的類型和功能狀態。
- 多組織兼容性:適用于新鮮冷凍、多聚甲醛/福爾馬林固定及石蠟包埋組織,無需復雜預處理即可獲得高質量染色結果。
四、技術優勢
1. 即用型設計,簡化實驗流程
- 試劑盒包含FJC染色液、DAPI復染液、氫氧化鈉和KMnO?,無需自行配制,直接使用。
- 標準化操作步驟:組織切片經固定、通透化后,只需依次浸入KMnO?(消除背景)、FJC染色液(30分鐘)和DAPI(5分鐘),全程可在2小時內完成。
2. 高靈敏度與特異性
- 信噪比優勢:FJC的信號背景比顯著高于FJB和硫黃素S,在低倍鏡下即可清晰觀察退變神經元的分布,尤其適合大樣本定量分析。
- 非特異性染色控制:通過KMnO?預處理消除組織內自發熒光,結合DAPI復染細胞核,可有效區分神經元與血管、膠質細胞等非特異性染色。
3. 兼容性與靈活性
- 多重熒光標記:FJC的激發/發射光譜與Alexa Fluor 488、Cy3等常用熒光素無重疊,可與β-淀粉樣蛋白(Aβ)、磷酸化tau蛋白等抗體聯合使用,實現退變神經元與病理標志物的共定位分析。
- 跨物種應用:已在小鼠、大鼠、猴及人類腦組織中驗證,適用于多種神經退行性疾病模型(如5×FAD轉基因小鼠、MPTP誘導的PD模型)。
4. 抗干擾與穩定性
- 抗組織處理干擾:對福爾馬林固定、石蠟包埋等劇烈處理具有耐受性,染色結果重復性高。
- 長期保存性能:未開封試劑盒可在4℃穩定保存12個月,稀釋后的染色液需在4小時內使用以確保最佳效果。
五、應用場景與客戶群體
1. 核心應用領域
- 神經退行性疾病研究:
- 阿爾茨海默病(AD):檢測Aβ斑塊周圍的退變神經元,研究突觸丟失與認知功能的關系。
- 帕金森病(PD):在MPTP誘導的小鼠模型中,定位黑質致密部(SNc)多巴胺能神經元的退變過程。
- 肌側索硬化(ALS):分析脊髓運動神經元的軸突退變與膠質細胞反應。
- 神經損傷與修復研究:
- 腦缺血模型:檢測缺血半暗帶神經元的退變動態,評估溶栓治療效果。
- 脊髓損傷模型:追蹤軸突再生過程中退變軸突的清除效率。
- 藥物研發與毒性評估:
- 神經保護藥物篩選:在細胞或動物模型中驗證候選藥物對退變神經元的保護作用。
- 神經毒性評價:評估藥物、重金屬等對中樞神經系統的損傷機制。
2. 目標客戶群體
- 科研機構與高校:神經科學、病理學、藥理學實驗室,用于基礎機制研究和論文發表。
- 生物醫藥企業:藥物研發部門,用于神經退行性疾病藥物的臨床前模型驗證。
- CRO公司:提供外包染色服務,支持藥物毒理學評價和病理分析。
六、訂貨信息
1. 中國代理商:上海起發
2. 注意事項
- 價格咨詢:產品價格需通過代理商獲取,根據訂購量可享批量折扣。
- 運輸與保存:試劑盒需4℃避光保存,運輸過程中使用冰袋確保穩定性。
- 實驗建議:
- 組織切片需充分固定(多聚甲醛或福爾馬林),避免非特異性染色。
- 染色后切片應避免長時間暴露于強光下,建議使用抗褪色封片劑(如含DAPI的SlowFade Gold)。
- 新鮮稀釋的FJC染色液好用,剩余溶液可冷藏避光保存48小時,但需在使用前過濾以去除沉淀。
七、技術驗證與典型案例
1. 實驗流程驗證
- 組織處理:取MPTP誘導的PD小鼠中腦切片,經4%多聚甲醛固定后,依次用KMnO?(0.01%)處理5分鐘、FJC染色液孵育30分鐘、DAPI復染5分鐘,封片后在熒光顯微鏡下觀察。
- 結果顯示:黑質致密部(SNc)可見大量FJC陽性神經元,胞體皺縮、樹突斷裂,與TH免疫熒光染色結果共定位,證實退變神經元為多巴胺能神經元。
2. 多重染色應用
- 實驗設計:在5×FAD轉基因小鼠腦切片中,同時進行FJC染色和Aβ免疫熒光標記(Alexa Fluor 594偶聯抗體)。
- 結果顯示:FJC陽性神經元環繞Aβ斑塊分布,提示斑塊周圍神經元退變與Aβ沉積密切相關。
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